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肽庫合成技術

蛋白和大分子由于傳遞和穩(wěn)定性的原因,通常作為藥物的時候是無效的。作為大分子,一個蛋白可能會有多種生物功能,每種功能可能由蛋白中某個特定的氨基酸序列的相互作用而形成。在基于多肽的藥物發(fā)現過程中,常規(guī)的一蛋白一實驗策略過于耗時耗錢。這要求有一種高通量的能夠快速高效的篩選大量化合物的方法。藥物開發(fā)被分為幾個不同的步驟。第一步是去"map"繪制蛋白的活性序列(也就是表位"epitope")。表位繪制將會合成一個由組成原始蛋白的重疊肽序列的肽庫(overlapping peptide sequences that makes up the original protein)。如果要決定肽庫的序列,需要考慮一下幾個因素:
  • 當肽庫多肽的長度增加時,所要合成的多肽的數量將會減少。

  • 當偏移數增加時(也就是從原始蛋白序列中轉移的多肽氨基酸殘基數),所要合成的多肽的數量將會減少。

  • 當多肽序列的長度變長時,復合位點(也就是序列包含表位中所有的重要的殘基)的可能性增加。

蛋白序列的長度決定了肽庫中多肽的數量。選擇更長的序列,更短的偏移數是很理想的方法,但是所需要的費用會大大增加。相反,短多肽序列,需要合成的多肽序列會增多,但是更經濟。因為很難預測我們需要的多肽的理想最少數量,所以在實際操作中,通常選用8-20個氨基酸(最好12-16這個范圍),偏移數是多肽長度三分之一的方法。
肽庫的種類
  • 丙氨酸掃描肽庫(Alanine Scanning Library)

    Ala掃描多肽文庫是鑒別序列中特定氨基酸對多肽功效影響的一種途徑,我們使用Ala依次替換序列中的氨基酸;通過Ala掃描多肽文庫以辨出某一特定氨基酸對整個蛋白結構、功能和其他生物活性的影響。

  • 單位點掃描多肽文庫(Positional Scanning Library)

    單位點掃描多肽文庫是對多肽序列進行優(yōu)化的一個重要工具,對多肽某個選定的區(qū)域或位點被系統(tǒng)地用其他氨基酸替換,通過多肽活性測定以確定這個位點最優(yōu)的氨基酸。這類肽庫有助于研究人員發(fā)現在某個特定位置上具有特殊影響或活性的特定區(qū)域。

  • 首尾相搭多肽文庫(Overlapping Library)

    首尾相搭多肽文庫是用于篩選線性或連續(xù)性表位的一種常用手段。這種肽庫的設計主要由肽長(peptide length)和步移(offset number)兩個參數決定。蛋白從N端開始,逐步向C端截取設計后,最后很有可能會剩下一條孤肽(Orphan peptide),我們建議將N端轉移一個或者幾個氨基酸過來,以保持一致長度。

  • 截頭多肽文庫(Truncation peptide libraries)

    截頭多肽文庫被用來確認多肽序列中起到活性作用的最短氨基酸序列,截頭多肽文庫的建立方法一般是系統(tǒng)性地去除原多肽序列兩側氨基酸而得到的。假如已知某些起重要作用的氨基酸,那么應該保留這些氨基酸序列然后從肽的另外一端開始逐個去除氨基酸開始篩選。

  • 隨機多肽文庫(Random Peptide Library)

    隨機多肽文庫的設計是以20種天然氨基酸通過鳥槍式法(shotgun approach)同時地、隨機地取代被選擇的氨基酸殘基。

  • 雜亂肽庫(Scrambled Library)

    Scrambled Library的設計是基于對原有多肽氨基酸序列進行內部置換來實現的。它是突變程度最高的多肽文庫,被打亂的多肽通常被用于作為陰性對照證實某一特定序列是蛋白功能或活性的關健。它也是一個用來發(fā)現新目標的隨機篩選工具。

肽庫設計的最后一步是提高多肽序列的穩(wěn)定性,以便維持多肽的性能,我們通常使用以下三種辦法來實現:
  • 最常用的方法是使用非天然氨基酸來替代選中的氨基酸位點,比如天然氨基酸對應的高-氨基酸(比如:鳥氨酸(ornithine),高賴氨酸(homolysine),正亮氨酸(norleucine),正纈氨酸(norvaline)或者對應的D型氨基酸)。

  • 另外一個方法是讓多肽形成二硫鍵。

  • 還可以通過化學修飾比如N端氨基的乙?;虲端的酰胺化來實現。

服務特色
鴻肽生物的六種多肽文庫,為高通量藥物的篩選和蛋白質相互作用的鑒定提供了可靠的平臺。我們多肽文庫構建服務特點:
  • 粗品:我們保證純度大于40%,也有純度大于90%的情況發(fā)生,主要依賴于氨基酸序列, 同時也與合成工藝有關。

  • 純品:我們提供純度分別為70%,75%,80%,85%,90%,95%,98%和99%的純品多肽,客 戶可以根據自身實驗需求定制。

  • 脫鹽和轉鹽:根據客戶要求,我們可以對多肽進行脫TFA鹽處理,也可以轉為醋酸鹽。

  • 合成長度:肽庫一般氨基酸個數在1-30之間。

  • 交貨期限:一般2-3周,最快1-2周。

  • 質量控制:每條多肽都免費提供合格的HPLC,MS和COA文件。

  • 合成數量:安博生物肽庫月通量可達8000-10000條。

  • 售后服務:客戶1-2周內可以提出異議,我們免費復測,不合格免費退貨,1-3個月內使用 不合格可以免費提供復測,樣品免費保存3個月。

  • 技術支持:客戶享受經驗豐富的技術專家一對一服務。

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