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多肽FRET標(biāo)記技術(shù)

FRET（熒光共振能量轉(zhuǎn)移）是一種距離依賴的通過(guò)將供體分子的激發(fā)態(tài)能量轉(zhuǎn)移到受體分子，從而導(dǎo)致熒光淬滅的過(guò)程。這種技術(shù)可以檢測(cè)分子在納米范圍內(nèi)的相互作用。FRET多肽通常標(biāo)記有標(biāo)有供體分子(熒光基團(tuán))和受體分子(淬滅基團(tuán))。FRET多肽可以標(biāo)記同一種熒光分子，但是在大多數(shù)情況下，熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)是兩種不同的染料分子。如果熒光受體是非熒光染料（淬滅基團(tuán)），則熒光供體轉(zhuǎn)移的能量將轉(zhuǎn)化為分子振動(dòng)。當(dāng)FRET終止時(shí)（熒光供體和受體分離），可以檢測(cè)到供體熒光的增加。當(dāng)供體和受體均為熒光染料時(shí)，轉(zhuǎn)移的能量將作為波長(zhǎng)較長(zhǎng)的熒光的光被發(fā)射出來(lái)，這樣，供體和受體熒光的強(qiáng)度比例將會(huì)有一個(gè)改變從而可以被檢測(cè)出來(lái)。 為了使FRET能夠有效的進(jìn)行，熒光分子和淬滅分子必須彼此接近（約10-100 ?），淬滅基團(tuán)的吸收光譜必須與熒光基團(tuán)的發(fā)射光譜要有重疊。因此在設(shè)計(jì)供體-淬滅劑FRET系統(tǒng)時(shí)，我們需要需要仔細(xì)比較供體的發(fā)射光譜和淬滅劑的吸收光譜。 鴻肽生物在FRET多肽的合成方面有著豐富的經(jīng)驗(yàn)，我們可以為您的科研活動(dòng)提供種類齊全的FRET熒光組合。

FRET過(guò)程示意圖

Caspase-1水解底物多肽產(chǎn)生熒光的過(guò)程

TR-FRET(Time-resolved FRET)標(biāo)記技術(shù)
TR-FRET是指使用稀土金屬元素例如銪(Eu)作為熒光供體分子，這種熒光供體分子的熒光壽命要長(zhǎng)于背景干擾熒光，其特點(diǎn)為斯托克位移(激發(fā)峰位和發(fā)射峰位的波長(zhǎng)之間的差)大，使激發(fā)波和發(fā)射波之間的串?dāng)_降低，從而得到很高的信噪比。TR-FRET分析靈活，可靠，靈敏度高，通量高，且得到的假陽(yáng)性/假陰性結(jié)果較少。 偶聯(lián)DOTA的多肽通常被用于TR-FRET技術(shù)，通常通過(guò)DOTA將稀土金屬元素螯合到多肽上。
常用的FRET熒光組合對(duì)

供體(熒光染料)

Trp (Tryptophan)

Trp (Tryptophan)

Mca (7-Methoxycoumarin-4-yl)acetyl)

Abz (2-Aminobenzoyl)

Abz (2-Aminobenzoyl)

Abz (2-Aminobenzoyl)

EDANS (5-[(2-Aminoethyl) amino]naphthalene-1-sulfonic acid)

Lucifer Yellow

FITC (Fluorescein isothiocyanate)

Dansyl (5-(Dimethylamino) naphthalene-1-sulfonyl)

5-TAMRA (Carboxytetramethyl rhodamine)

Eu(III) Chelate

顏色

最大吸收波長(zhǎng)

280nm

280nm

325nm

320nm

320nm

320nm

340nm

430nm

490nm

342nm

547nm

340nm

最大發(fā)射波長(zhǎng)

360nm

360nm

392nm

420nm

420nm

420nm

490nm

520nm

520nm

562nm

573nm

613nm

受體(淬滅基團(tuán))

Dnp (2,4-Dinitrophenyl)

4-Nitro-Z (4-Nitro-benzyloxycarbonyl)

Dnp (2,4-Dinitrophenyl)

pNA (para-Nitroaniline)

3-Nitro-Tyr (3-Nitro-tyrosine)

4-Nitro-Phe (4-Nitro-phenylalanine)

Dabcyl (4-(4-Dimethylaminophenylazo)benzoyl)

Dabsyl (4-(4-Diethylaminophenylazo)-benzenesulfonyl)

Dnp (2,4-Dinitrophenyl)

4-Nitro-Phe (4-Nitro-phenylalanine)

QSY7

QSY-7

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