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二硫鍵成環(huán)技術(shù)

如果多肽或者蛋白中含有半胱氨酸(Cys)，那么半胱氨酸側(cè)鏈的巰基之間可以形成二硫鍵---一種可逆的共價鍵結(jié)構(gòu)。二硫鍵結(jié)構(gòu)可以讓線性多肽形成更加穩(wěn)定的二級結(jié)構(gòu)，可以提高多肽的抗水解性，某些情況下還可以增加其與對應(yīng)報告分子的親和性。 鴻肽生物經(jīng)過在多肽領(lǐng)域內(nèi)長期深入的研究，積累了大量的寶貴經(jīng)驗，我們已經(jīng)成功給客戶交付了大量的包括一對和兩對以上二硫鍵成環(huán)的多肽，并保持了我們高成功率，高質(zhì)量的特色。
一對二硫鍵的形成方法
一對二硫鍵的形成方法相對簡單，通常將多肽從樹脂上切割下來之后，將多肽溶于合適的溶劑中，使用氧化劑進行氧化即可；反應(yīng)條件有多種選擇，比如空氣氧化，DMSO氧化等溫和的氧化過程，也可以采用H2O2，I2，汞鹽等激烈的反應(yīng)條件。常用的方法有：

  • 空氣氧化法:


    空氣氧化法形成二硫鍵是多肽合成中最經(jīng)典的方法，通常是將巰基處于還原態(tài)的多肽溶于水中，在近中性或弱堿性條件下（PH值6.5-10），反應(yīng)24小時以上。為了降低分子之間二硫鍵形成的可能，該方法通常需要在低濃度條件下進行。

  • 碘氧化法:


    將多肽溶于25%的甲醇水溶液或30%的醋酸水溶液中，逐滴滴加10-15mol/L的碘進行氧化，反應(yīng)15-40min。當(dāng)肽鏈中含有對碘比較敏感的Tyr、Trp、Met和His的殘基時，氧化條件要控制的更精確，氧化完后，立即加入維生素C或硫代硫酸鈉除去過量的碘。

二對及多對二硫鍵的形成方法
當(dāng)序列中有兩對或多對二硫鍵需要成環(huán)時，通常有兩種情況：

  • 自然隨機成環(huán):


    序列中的Cys之間隨機成環(huán)，與一對二硫鍵成環(huán)條件相似；

  • 定點成環(huán):


    定點成環(huán)即序列中的Cys按照設(shè)計要求形成二硫鍵，反應(yīng)過程相對復(fù)雜。在固相合成多肽之前，需要提前設(shè)計幾對二硫鍵形成的順序和方法路線，選擇不同的側(cè)鏈巰基保護基，利用其性質(zhì)差異，分步氧化形成兩對或多對二硫鍵。通常采用的巰基保護基有trt, Acm, Mmt, tBu, Bzl, Mob, Tmob, Meb、TMTr、Npys等多種基團。

服務(wù)特色
服務(wù)特色

  • 二硫鍵成環(huán)合經(jīng)驗豐富，合成策略多，技術(shù)成熟

  • 嚴格的質(zhì)量檢測，包括質(zhì)譜檢測和HPLC檢測，對于多對二硫鍵成環(huán)，每個位點成環(huán)都將提供質(zhì)譜驗證報告

  • 純度>95%

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