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長肽合成技術(shù)

在現(xiàn)代生物學(xué)研究中，經(jīng)常會用到序列比較長的多肽，對于序列中含有60個以上氨基酸的多肽，通常會采用基因表達及SDS-PAGE法來獲得，但是這種方法周期長，最終產(chǎn)物分離效果差等，使固相法長肽合成技術(shù)成為一種需要。鴻肽生物經(jīng)過長期的摸索與積累，對合成工藝及方法不斷優(yōu)化，解決了長肽合成難，純化難的問題，我們長肽合成成功率高，質(zhì)量穩(wěn)定。
長肽合成面臨的困難及解決辦法
長肽合成中，我們一直面臨一個矛盾，即合成中隨著序列的增長，縮合反應(yīng)空間位阻增大，為了反應(yīng)完全，需要增加反應(yīng)時間；但是隨著反應(yīng)時間的延長，其產(chǎn)生的副反應(yīng)就越多，一些缺殘基的目標肽就隨之產(chǎn)生。這些缺殘基的肽鏈也是長肽合成過程中所產(chǎn)生的主要雜質(zhì)。 因此，長肽的合成過程中，我們需要克服的主要困難是探索更優(yōu)質(zhì)的反應(yīng)條件和反應(yīng)方法，從而使氨基酸縮合反應(yīng)進行的更充分更徹底。同時縮短反應(yīng)時間，因為反應(yīng)時間越長，不可控的副反應(yīng)相對的就越多，副產(chǎn)物就越復(fù)雜。 為此，鴻肽生物經(jīng)過多年的摸索與積累，總結(jié)出以下經(jīng)驗：

  • 對于反應(yīng)時間實行精準靈活的把控：我們在多肽合成多年的經(jīng)驗積累，使得我們對于多肽反應(yīng)時間能夠精準把控，在反應(yīng)完全-減少副產(chǎn)物上能夠找到平衡點；

  • 采用微波合成法：對于合成過程中出現(xiàn)的一些難以縮合的氨基酸，我們采用微波法進行合成，該方法效果顯著，并且大大縮短了反應(yīng)時間，同時減少了兩種主要副產(chǎn)物的產(chǎn)生。

  • 采用片段合成法：當某些多肽用常規(guī)合成方法合成困難，并且難以純化時，我們也會采用將多肽中某一段的某幾個氨基酸縮合之后作為一個整體縮合到肽鏈上去，這種方法也能夠解決許多合成中存在的問題。

  • 采用酰肼合成法：酰肼法合成多肽的方法是固相合成的N末端Cys多肽和C末端多肽酰肼之間的化學(xué)選擇性反應(yīng)形成酰胺鍵而實現(xiàn)多肽連接的方法。該方法根據(jù)肽鏈中Cys的位置，將整條肽鏈分成多條序列分別合成，最終經(jīng)過液相合縮反應(yīng)得到目標肽， 該方法不僅大大縮短了長肽合成時間，而且顯著地提高了最終產(chǎn)物純度，因此廣泛適用于含有Cys的長鏈多肽的合成。

長肽純化
長肽的特殊性不可避免的導(dǎo)致最后得到的粗品肽組分復(fù)雜，因此，對于長肽的HPLC純化也是一項挑戰(zhàn)；我們通過在amyloid系列多肽純化過程中，吸取大量經(jīng)驗并成功用于長肽純化，我們通過采用先進儀器，多純化體系混用，反復(fù)分離等經(jīng)驗手段，極大提升了我們長肽純化成功率。
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